促甲状腺激素对胆固醇转运的影响及作用机制
成果完成人
项目完成单位
山东省立医院
成果简介
本研究根据合同设计的研究内容开展了与本课题相关的实验研究,包括体内动物实验及体外细胞实验,得出结论小鼠或许存在CETP的表达且新生小鼠表达量高于成年小鼠。另外,TSH对肝脏CETP的表达及血清CETP的活性存在影响,取得的标志性成果简介如下： 1.首先为验证小鼠是否表达CETP方面开展的实验中我们发现,通过用人肝组织作为阳性对照的实验结果显示,成年小鼠CETP表达量虽不及人肝组织表达量丰富,但western-blot及免疫组化结果均显示小鼠存在CETP的表达。另外,我们发现,小鼠胚胎肝细胞系(BNL)CETP表达量较成年小鼠肝脏CETP表达量高出 2.2倍,于是我们选取了新生小鼠肝脏组织与成年小鼠肝脏组织作对比发现新生小鼠CETP表达量较成年12周小鼠CETP表达量高出 1.7倍。由此我们得出结论,小鼠或许表达CETP且新生小鼠表达量高于成年小鼠。 2.通过他巴唑喂养的方法建立亚临床甲状腺功能减退小鼠模型。检测亚甲减组及正常对照组血脂谱,发现亚甲减组较正常对照组血浆总胆固醇(TC)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)也明显增加。检测肝脏内总胆固醇、游离胆固醇及胆固醇酯结果显示亚甲减组肝内总肝固醇含量及胆固醇酯含量较正常对照组明显升高。用western-blot的方法检测两组肝脏CETP表达的差异发现亚甲减组CETP蛋白表达较正常对照组CETP蛋白表达量略低。提示TSH与肝脏CETP的蛋白表达量可能为负相关。 3.建立TSHR-/-小鼠模型,验证TSHR介导TSH调控CETP及胆固醇转运。该模型为阐明TSHR介导的TSH效应提供了具有独特优势的活体环境。检测TSHR-/-小鼠组及野生型小鼠组血脂谱,发现野生型小鼠较TSHR-/-小鼠血浆总胆固醇(TC)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高。检测肝脏内总胆固醇、游离胆固醇及胆固醇酯结果显示野生型小鼠较TSHR-/-小鼠肝内总肝固醇含量及胆固醇酯含量较正常对照组明显升高。用western-blot的方法检测两组肝脏CETP表达的差异发现野生型小鼠CETP蛋白表达较TSHR-/-小鼠CETP蛋白表达量略低。提示TSH与肝脏CETP的蛋白表达量可能为负相关。 4.体外实验部分,我们应用HepG2细胞培养来验证TSH对CETP表达的量效和时效关系。分别应用0、0.5、1、2、4μM浓度的TSH处理HepG2细胞24小时,发现随着TSH浓度增加,RT-PCR检测CETP的mRNA表达量有降低的趋势,western-blot检测CETP的蛋白表达量也有降低的趋势。另外用2μM的TSH分别处理HepG2细胞12h、24h、48h,发现在24h时RT-PCR检测CETP的mRNA表达量降低最明显,western-blot检测CETP的蛋白表达量也在24H时降低最明显。 5.另外与本课题相关的TSH对甘油三酯的调节及其机制的实验也得出结论证明通过研究TSHR介导的TSH作用,上调肝细胞SREBP-1c表达,增加肝细胞内总甘油三酯含量,促进肝脏脂肪变及NAFLD的发生,从而揭示TSH在甘油三酯合成中的可能作用,揭示亚临床甲减致NAFLD的分子机制。
基本信息
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所属机构:内分泌
归属医师:周新丽
年份:2016
公布年份:2016-02-01
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